Presencia de proteasas en productos de excreción y secreción (ES) de larvas L3A de Gnathostoma sp. y su caracterización parcial

Propiedades

Título

Presencia de proteasas en productos de excreción y secreción (ES) de larvas L3A de Gnathostoma sp. y su caracterización parcial

Autor

Guadalupe Herminia Ventura Ramón

Director de Tesis

Norberto Vibanco Pérez, Ma. de Jesús Duran Avelar

Palabras clave

Parásitos -- Aves -- Insectos -- Peces -- Tesis y disertaciones académicas Excreción -- Larvas -- Tesis y disertaciones académicas

Fecha de titulación

2004

Editorial

Universidad Autónoma de Nayarit

Resumen

El objetivo principal de esta investigación fue evidenciar la presencia de proteasas en los productos de excreción y secreción (ES) de larvas de tercer estadio avanzado (L3A) de Gnathostoma sp. cultivadas in vitro, así como realizar su caracterización bioquímica parcial y determinar su perfil de inhibición. Para el desarrollo experimental, se obtuvieron larvas L3A a partir de tejido muscular de pescado comercializado en la ciudad de Tepic, Nayarit. Las larvas fueron cultivadas in vitro en solución salina amortiguadora de fosfatos (PBS, pH 7.3) a temperatura ambiente durante 48 horas para recolectar los productos ES libres de contaminantes externos. Tras cuantificar la concentración de proteínas por espectrofotometría, los productos ES se analizaron mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 10% bajo condiciones no desnaturalizantes (zimgrafía), copolimerizados individualmente con gelatina, fibronectina plasmática humana, gammaglobulinas humanas e inmunoglobulinas de oveja. Asimismo, se evaluó el efecto de los inhibidores específicos TLCK, PMSF, E-64, Pepstatin A y EDTA sobre la actividad enzimática. Se identificaron cuatro bandas con actividad proteolítica sobre gelatina (denominadas 90, 55, 50 y 47). De estas, las proteasas 90, 55 y 50 mostraron capacidad para degradar fibronectina humana (proteína de la matriz extracelular), mientras que las proteasas 90 y 55 hidrolizaron también las inmunoglobulinas humanas y de oveja. En los ensayos de inhibición, la actividad de la banda 90 fue completamente bloqueada por EDTA, lo que la clasifica como una metaloproteasa. Se concluye que las proteasas presentes en los productos de excreción y secreción de las larvas L3A de Gnathostoma sp. actúan como importantes factores de patogenicidad, pues facilitan el avance y la migración tisular del parásito al degradar la matriz extracelular y participan en la evasión de la respuesta inmune humoral del hospedero mediante la degradación de anticuerpos. Por ello, se consideran moléculas clave y blancos potenciales para el diseño de estrategias inmunoprofilácticas o esquemas farmacológicos.

Programa educativo

Químico Farmacobiólogo