Producción de proteasas de secreción por larvas de tercer estadio avanzado (L3A) de Gnathostoma binucleatum obtenidas de ratones infectados experimentalmente

Propiedades

Título

Producción de proteasas de secreción por larvas de tercer estadio avanzado (L3A) de Gnathostoma binucleatum obtenidas de ratones infectados experimentalmente

Autor

Marcelo Victorio de los Santos

Director de Tesis

Norberto Vivanco Pérez

Palabras clave

Larva -- Tesis y disertaciones académicas

Fecha de titulación

2004

Editorial

Universidad Autónoma de Nayarit

Resumen

El objetivo del presente trabajo de investigación fue definir el patrón proteolítico de los productos de excreción y secreción (E/S) producidos por larvas de tercer estadio avanzado (L3A) de Gnathostoma binucleatum recuperadas del hígado de ratones infectados experimentalmente. Las larvas con movilidad obtenidas del modelo murino fueron cultivadas in vitro durante 48 horas en solución salina amortiguada de fosfatos (PBS) estéril para recolectar los productos de E/S. El análisis por electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE al 10% en condiciones no reductoras) y tinción con plata reveló la presencia de 14 bandas proteicas con pesos moleculares aparentes de entre 25 y 150 kDa. Mediante un ensayo colorimétrico en fase líquida utilizando caseína succinilada, se cuantificó una concentración de 1.2 µg/mL de proteasas en los productos de E/S. La evaluación de la actividad proteolítica en zimogramas (fase sólida) demostró que las proteasas secretadas presentan capacidad de degradación sobre diversos sustratos proteicos: Se observaron 4 zonas de proteólisis sobre gelatina porcina al 0.1% con pesos moleculares aparentes de 53, 71, 92 y 114 kDa. Se detectaron 5 zonas de actividad sobre caseína bovina al 0.1% y sobre fibronectina humana al 0.0125%, correspondientes a 25, 30, 33, 53 y 114 kDa. Sobre la fracción de gammaglobulina humana total al 0.0125% se identificó una zona tenue de degradación de 53 kDa, mientras que no se observó actividad proteolítica frente a IgG de borrego. Se concluye que las larvas L3A de G. binucleatum en un modelo murino secretan un conjunto heterogéneo de proteasas. En particular, la proteasa con peso aparente de 53 kDa degrada tanto componentes de la matriz extracelular como moléculas involucradas en la respuesta inmune, lo que sugiere su participación en procesos de invasión tisular, nutrición y evasión inmunitaria en el hospedero.

Programa educativo

Químico Farmacobiólogo