Determinación de la presencia de cisteín proteasas en productos de excreción - secreción de larvas (L3A) de Gnathostoma binucleatum

Propiedades

Título

Determinación de la presencia de cisteín proteasas en productos de excreción - secreción de larvas (L3A) de Gnathostoma binucleatum

Autor

Carlos Alonso Preciado Ocegueda

Director de Tesis

Norberto Vlbanco Pérez

Palabras clave

Parásitos -- Tesis y disertaciones académicas

Fecha de titulación

2005

Editorial

Universidad Autónoma de Nayarit

Resumen

La gnathostomosis humana es una zoonosis parasitaria de alta prevalencia en el estado de Nayarit, causada por la ingestión de carne cruda o insuficientemente cocida de pescado infectado con larvas de tercer estadio avanzado (L3A) de Gnathostoma binucleatum. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la presencia de cisteín proteasas en los productos de excreción-secreción (ES) de larvas L3A de G. binucleatum, una familia de enzimas clave involucrada en la invasión tisular, nutrición y evasión de la respuesta inmune en otros helmintos. Se recolectaron 150 larvas L3A a partir de pescado molido comercializado en la ciudad de Tepic, Nayarit, las cuales se cultivaron in vitro durante 48 horas en PBS (pH 7.4) divididas en dos lotes: uno en ausencia de EDTA y otro en presencia de EDTA (200 mM) para inhibir la degradación mediada por metaloproteasas. La actividad proteolítica general se verificó mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 10% copolimerizados con gelatina al 0.05%. Se observaron cuatro bandas claras de actividad degradativa en los productos de ES cultivados con EDTA y una sola banda en las muestras sin EDTA, confirmando la presencia de proteasas activas en las secreciones del parásito. Adicionalmente, se realizaron ensayos fluorométricos utilizando el sustrato sintético específico Z-Phe-Arg-AFC en amortiguador de citrato de sodio 0.2 M a pH 4.9 y 6.5. Bajo la metodología y las condiciones experimentales empleadas, no se detectó actividad enzimática significativa sobre el sustrato sintético para cisteín proteasas. Se concluye que las cisteín proteasas podrían no ser secretadas en condiciones de cultivo in vitro, ser producidas en cantidades inferiores al límite de detección del ensayo o no estar presentes en las secreciones de este estadio larvario.

Programa educativo

Químico Farmacobiólogo