Estandarización de métodos moleculares para la identificación de la mutación T>C 1843 del gen de halotano

Propiedades

Título

Estandarización de métodos moleculares para la identificación de la mutación T>C 1843 del gen de halotano

Autor

Mónica Rodríguez Jiménez

Director de Tesis

Clemente Lemus Flores, Javier German Rodriguez Carpena, Rogelio Alonso Morales

Palabras clave

Genética animal Cría de cerdos

Fecha de titulación

2004

Editorial

Universidad Autónoma de Nayarit

Resumen

Este trabajo de investigación tuvo como objetivo principal estandarizar métodos de diagnóstico molecular basados en ADN para identificar la presencia de la mutación T>C 1843 en el gen del Halotano (asociada al Síndrome de Estrés Porcino) en cerdos. El estudio se realizó en el Laboratorio de Genética Molecular de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de Nayarit, en Compostela, Nayarit. Para el desarrollo del trabajo, se emplearon 15 muestras de control provenientes de cerdos previamente genotipificados para los tres genotipos posibles (homocigotos normales, heterocigotos portadores y homocigotos mutantes). La extracción de ADN se llevó a cabo mediante el protocolo de purificación fenólica a partir de muestras de sangre con anticoagulante EDTA. Para la amplificación por PCR, se evaluaron cuatro juegos de iniciadores (primers) y un gradiente de temperaturas de alineación de 62 °C a 67 °C, resultando el juego de iniciadores 5-R2 con una temperatura de alineación a 67 °C como la combinación óptima. Se evaluaron tres métodos de diagnóstico molecular:RFLP con la enzima HhaI: Permitió la diferenciación clara de los tres genotipos mediante patrones de fragmentos de restricción. RFLP con la enzima BsiHKAI: Asimismo, permitió discriminar exitosamente entre los genotipos normal, mutante y heterocigoto. Reacción MS-PCR (Mutagenically Separated-PCR): Con la metodología empleada no se logró la diferenciación clara de fragmentos entre genotipos. Se concluye que existen variaciones técnicas importantes entre las metodologías analizadas, por lo que su estandarización previa es fundamental. Un diseño adecuado de los iniciadores facilita el proceso de PCR y los posteriores análisis por RFLP, siendo además determinante el uso de reactivos de alta calidad.

Programa educativo

Médico Veterinario Zootecnista