Caracterización de la interacción de la lectina bacteriana PirBvp con su ligando en la línea celular MCF-7 de cáncer de mama

Propiedades

Título

Caracterización de la interacción de la lectina bacteriana PirBvp con su ligando en la línea celular MCF-7 de cáncer de mama

Autor

Paola Alejandra Quintero Gradilla

Director de Tesis

director, Marcelo Victorio de los Santos ; codirectora, Miriam Fabiola Ayón Pérez

Palabras clave

Lectinas -- Fisiopatología -- Tesis y disertaciones académicas | Mamas - Cáncer -- Tesis y disertaciones académicas | Proteínas -- Tesis y disertaciones académicas

Fecha de titulación

2026

Editorial

Universidad Autónoma de Nayarit

Resumen

Fundamentos y Objetivos:
Contexto: La toxina PirABVP, secretada por Vibrio parahaemolyticus, contiene en su subunidad B (PirBVP) un dominio tipo Jacalina con capacidad de reconocer carbohidratos, aminoazúcares y aminoglicanos sulfatados. En el cáncer de mama, las células experimentan glicosilación aberrante, sobreexpresando antígenos tumorales asociados a carbohidratos (TACAs) como Tn, TF, sTn y variantes de Sialil Lewis.
Objetivo General: Identificar, mediante herramientas computacionales y ensayos celulares, el ligando de unión de la lectina bacteriana PirBVP en la línea celular tumoral de cáncer de mama MCF-7.
Metodología:
Análisis Computacional: Se realizaron acoplamientos moleculares rígidos y flexibles entre PirBVP y los ligandos Tn, TF, $sLe^x$ y $sLe^{xSO3}$ utilizando AutoDock Vina. Se ejecutaron simulaciones de dinámica molecular (DM) de 100 ns con el software Desmond para evaluar la estabilidad del complejo PirBVP-$sLe^{xSO3}$.
Metodología Experimental:
Cultivo de la línea celular MCF-7 y obtención de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) como control no tumoral.
Extracción de proteínas (ECP) y purificación de glicoproteínas por cromatografía de afinidad utilizando rPirBVP inmovilizada en Sepharosa 4B.
Análisis por electroforesis (SDS-PAGE), tinción de plata y ensayos de Lectin blot.
Pruebas de inhibición competitiva empleando carbohidratos (GlcNAc, IPTG) y glicoproteínas (fetuina).
Resultados Principales:
Dominios de Reconocimiento (CRDs): El análisis computacional identificó dos CRDs putativos en el dominio C-terminal de PirBVP: el CRD-1 (específico para monosacáridos y estructuras lineales como Tn) y el CRD-2 (afín a oligosacáridos complejos y ramificados como TF, $sLe^x$ y $sLe^{xSO3}$).
Energías de Unión: El ligando sulfatado $sLe^{xSO3}$ demostró la mayor energía de unión y estabilidad en los acoplamientos rígidos y flexibles ($\Delta E$ de hasta $-9.0\text{ kcal/mol}$), confirmado por la estabilidad del complejo en las dinámicas moleculares. Los residuos clave implicados en la interacción incluyeron Ala411, Gly341, Asp412 y Glu339.
Aislamiento y Reconocimiento Celular: La cromatografía de afinidad y el Lectin blot revelaron que PirBVP reconoce específicamente glicoproteínas de aproximadamente 75 y 82 kDa (PR-75 y PR-82) en los extractos de MCF-7. Los ensayos de inhibición con fetuina y GlcNAc demostraron que esta interacción es competitiva y dependiente de carbohidratos.
Selectividad Diferencial: PirBVP mostró un patrón de reconocimiento diferencial al comparar las células tumorales (MCF-7) con las no tumorales (PBMCs), lo que evidencia variaciones fenotípicas en la disponibilidad y organización de los glicanos.
Conclusiones:
La subunidad PirBVP actúa como una lectina capaz de reconocer selectivamente glicoconjugados tumorales, sugiriendo un gran potencial biotecnológico como herramienta para la identificación de firmas de glicosilación en cáncer de mama y para el desarrollo de estrategias diagnósticas y terapéuticas dirigidas a glicanos.

Programa educativo

Maestría en Ciencias Biomédicas